Bases Bioquímicas de los Métodos de Determinación de Hemoglobina Glicosilada y Lípidos.



"La hemoglobina glicosilada es una heteroproteína de la sangre que resulta de la unión de la Hemoglobina con carbohidratos libres."1

A través de varios estudios se ha identificado que las proteínas se pueden unir a la glucosa de manera natural, y esta unión se ha identificado que es irreversible y de manera no enzimática. El porcentaje de proteína unida a glucosa es lo que denominamos hemoglobina glicosilada, se ha identificado que mientras mayor es la concentración de glucosa en la sangre, mayor es la probabilidad de esta unirse a una proteína (como la hemoglobina).
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Fuente: http://www.estudiabetes.org/forum/topics/hemoglobina-glucosilada-que-es

"La hemoglobina glicosilada se forma de modo no enzimático mediante una reacción de dos pasos: la primera, es rápida y produce una aldimina lábil o base de Schiff; a continuación la aldimina experimenta lentamente una reorganización de Adamori y se convierte en una cetoamina más estable, dando lugar a la hemoglobina glicosilada. La mayoría de las pruebas de hemoglobina glicosilada miden la cetoamina estable y no el producto más lábil, que es más propenso a estar influenciado por la dieta ingerida recientemente."1
"La hemoglobina glicosilada tiene varias fracciones y de ellas, la más estable, la que tiene una unión con la glucosa más específica es la fracción HbA1c."2 Por otra parte como sabemos que el promedio de vida de un eritrocito es de 120 días, se puede analizar el procentaje de hemoglobina glicosilada cada 4 meses, utilizando esto para identificar si el tratamiento que se ha indicado al paciente es efectivo o no.

Correlación de HbA1c con niveles de glicemia
HbA1c
Glicemia promedio mg/dl
6
126
7
154
8
183
9
212
10
240
11
269
12
298
Fuente: Standards of Medical Care in Diabetes—2009. Tabla 8



Existen varias técnicas que se utilizan para la determinación de hemoglobina glicosilada (HbA1c), tales como:

Inmunoturbidimetría: "Método basado en reacciones inmunológicas. Consiste en la valoración de la disminución de la potencia radiante, de una emisión policromática, al atravesar una solución de partículas, medida en la misma dirección en que es emitida."3

Electroforesis: "Técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use"4

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Fuente: http://matragut.wordpress.com/2011/02/21/tema-6-la-revolucion-genetica/

Cromatografía de intercambio iónico/catiónico: Esta técnica se basa en la separación de moléculas a partir de sus cargas eléctricas.
En el caso de una cromotografía de intercambio iónico se utiliza una columna de carga eléctrica positiva, de tal manera que al difundir sobre ella las moléculas electrostáticas, quedarán adheridas a la columna aquellas moléculas de carga opuesta, es decir quedan adheridas las molésculas con carga eléctrica negativa, es decir iones, mientras que aquellas molésculas de carga semejante serán excluidos de la columna, debido a que las cargas eléctricas iguales se repelen, por lo tanto quedara separado de la columna, aquellas moléculas de carga positiva, es decir cationes. A esta técnica la llamamos cromotografía de intercambio iónico ya que la columna atrae iones. En el caso de una cromotografía de intercambio catiónico, sería a la inversa del anterior, tendríamos una columna de carga eléctrica negativa, en la cual quedarán retenidas aquellas molésculas de carga opuesta, cationes, mientras que aquellas moléculas de carga semejante a la columna serán excluidos de ella, es decir se excluyen los iones. A esta técnica la llamamos cromotografía de intercambio catiónico ya que se quedaran adheridos a la columna cationes.
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Fuente: http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/cromatografia.htm
Colorimetría: "Técnica instrumental que tiene por objeto determinar la absorción de luz visible por una muestra, que puede ser una sustancia pura o bien una mezcla o disolución."5
Color.gif Fuente: http://www.uned.es/094258/contenido/tecnicas/colorimetria/colorimetria.htm

Cromatografía de alta eficacia o High Performance Liquid Chromatography (HPLC): Se basa en separar diversos compuestos en base a su polaridad y consiste en dos fases: una fase estacionaria polar y una fase móvil de polaridad moderada. En la primera fase habrá una retención para aquellas moléculas apolares, mientras que las móleculas que sean de carácter polar eluyen más fácilmente. "El tiempo de retención aumenta con la adición de disolvente polar a la fase móvil y disminuye con la introducción de disolventes más hidrofóbicos."6 "la cromatografía líquida clásica se lleva a cabo en una columna generalmente de vidrio, la cual está rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra en la parte superior, se hace fluir la fase móvil a través de la columna por efecto de la gravedad. Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamaño de la partículas de la fase fija se fue disminuyendo hasta el tamaño de los micrones, lo cual generó la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase móvil, por lo tanto la HPLC requiere de instrumental especial que permite trabajar con las altas presiones requeridas."7
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Fuente: http://www.waters.com/waters/nav.htm?cid=10049055&locale=es_ES

Métodos para la extracción de lípidos



Método de Soxhlet: “El método consiste en una extracción de lípidos semi-continua con el solvente o mezcla de solvente orgánicos adecuados según el tipo de grasa a extraer.” 8
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Fuente: http://4.bp.blogspot.com/_sqAz54LxOWI/S9VoofnbpJI/AAAAAAAAACE/i2ev3h3Ac1w/s1600/Soxhlet_diag2.JPG






Método de Schmid-Bondzynski-Ratzlaff: Es un método muy empleado para determinar la concentración de lípidos en queso y leche en polvo. Consiste en tomar una concentración de la muestra y agregarle HCL, posteriormente calentarla hasta que las proteínas estén completamente disueltas, luego esto se deja enfriar y se le añade alcohol (alcohol etílico y éter), posteriormente se mide el volumen de la fase etérea, se evapora y se mide nuevamente el volumen de lípidos por diferencia.
Método de Gerber: Esta técnica consiste en medir la concentración de lípidos en leche fluida, para ello se utiliza un butirómetro (instrumento destinado a medir la cantidad de manteca en la leche).
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Fuente: http://www.concope.gov.ec/Ecuaterritorial/paginas/Apoyo_Agro/Tecnologia_innovacion/Agroindustrial/Quesos/quesos.htm
Método de Rose Gottlieb: Para este método se utiliza NH4OH concentrado, etanol, éter etílico y éter de petróleo. Este método permite la separación de grasa por amoníaco y etanol con un posterior efecto de deshirataci´ñon sobre los fosfolípidos. “La grasa es disuelta en éter recién destilado y se añade algo de petróleo de tal suerte que se separen algunos compuestos no lipídicos que se puedan encontrar en la fase etérea. Esta mezcla es completamente inmisible en agua de manera que mediante una extracción adecuada es simple dejar la grasa en la fase etérea y el residuo graso es pesado.”9 Se utiliza para la leche fresca libre de ácidos graos libres.

Correlación

Como hemos podido observar con el paciente Amador A'Petitus, este señor presenta una hemoglobina glicosilada de 7.5% al igual que la cantidad de triglicéridos: 295 mg/dl, son concentraciones muy elevadas de estos compuestos, a través de todo el trabajo hemos descubierto que este paciente presenta diabetes tipo 2 y esta debe de ser tratada, para ello los doctores realizan la determinación de hemoglobina glicosilada en un paciente con diabetes , de tal manera de comprobar que tan bien esta progresando con el señor el tratamiento que se le ha sido indicado. Con los resultados de hemoglobina glicosilada podemos observar que son ligeramente elevados, ya que un paciente con diabetes controlada debería de estar en una concentración de hemoglobina glicosilada en 7%.

Referencias Bibliográficas


















Elaborado por Br. Ginamar El Haddad Jaouiche